¿Es la precisión el precio que estamos pagando por unos resultados más rápidos?
¿Velocidad o precisión? ¿Hay que elegir? Aplicando las tecnologías adecuadas y prestando atención a las directrices básicas de muestreo se puede reducir el tiempo total de obtención de resultados sin sacrificar la precisión.
Cuando se visitan las instalaciones de un elevador de grano, es habitual ver varios camiones haciendo cola frente al punto de recepción de grano. Durante la temporada de cosecha, pueden alinearse hasta 100 camiones en un día cualquiera. El punto de recepción tiene que tomar una decisión rápida sobre si los camiones transportan grano que está por debajo de los límites definidos de contaminación por micotoxinas y, por tanto, puede ser admitido en las operaciones de la instalación. En los años de cosecha en los que los niveles de contaminación son elevados, la carga de cada camión será sondeada y analizada en busca de micotoxinas antes de su admisión en la instalación. Esto debe hacerse rápidamente porque disponer de los resultados lo antes posible acorta significativamente el tiempo de espera al final de la cola. La rapidez de los ensayos es clave, pero ¿hasta qué punto compromete la precisión? Estos son dos puntos importantes que abordaremos a continuación. Para dar una respuesta, primero definiremos el método adecuado para una aplicación de este tipo.
Cada camión se sondea y analiza consecutivamente, por lo que se requiere un método de ensayo rápido, fácil de usar y para una sola muestra. Las pruebas de dispositivo de flujo lateral (LFD), también conocidas como pruebas de tiras o varillas, son uno de los métodos de prueba más rápidos disponibles y un ajuste perfecto para este escenario. Debido a su sencillez, estas pruebas pueden ser realizadas por casi cualquier persona con una formación básica y suelen producir resultados analíticos en poco menos de diez minutos. Esto permite tomar decisiones rápidas sobre si la carga útil de un camión puede ser aceptada en las instalaciones del elevador de grano.
Publicado en:
Micotoxinas
Este artículo fue publicado en Spot On #4
¿Tiene curiosidad por ver qué le ofrece Spot On?
Lee ahoraCómo funcionan los dispositivos de flujo lateral
Para obtener un resultado rápido de la prueba LFD, se muele una muestra de grano y se extrae con novedosas soluciones de extracción a base de agua, siguiendo un tiempo de revelado posterior de tan sólo tres minutos para formar líneas visibles de prueba y de control. En combinación con un lector, las líneas se utilizan después para la cuantificación. Durante los tres minutos de desarrollo de la LFD, el extracto de la muestra fluirá sobre la tira y los anticuerpos específicos de micotoxinas se unirán a las micotoxinas presentes en la muestra. Estos sitios de anticuerpos bloqueados no pueden utilizarse entonces para unirse a los anticuerpos acoplados a coloides de oro visibles a la línea de prueba LFD, lo que resulta en una menor intensidad de la línea de prueba. Por lo tanto, cuanto mayor sea la concentración de micotoxinas en una muestra, menor será la intensidad de la línea de prueba. La línea de control se unirá a cualquier exceso de conjugados de oro anticuerpo, produciendo una línea visible que prueba que el desarrollo del LFD fue exitoso. Un resultado de prueba tan rápido y asequible no puede ser producido por ningún otro método de prueba comercial. Por lo tanto, la tecnología LFD demuestra su fuerza única en el análisis del punto de recepción.
¿Qué más hay en el mercado?
También existen en el mercado otros métodos de prueba rápida de micotoxinas, como los ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA). Las pruebas ELISA, sin embargo, requieren una curva de calibración con cada análisis que puede tardar unos 20 minutos en producir un resultado final. Por lo tanto, estos métodos sólo son viables cuando se analizan varias muestras en paralelo utilizando la misma curva de calibración. Otro grupo de métodos de análisis de micotoxinas son los métodos de análisis de referencia, entre los que se incluyen la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), así como la cromatografía líquida con detección por espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS). Se trata de métodos típicos de laboratorio asociados a una gran precisión y reproducibilidad. El inconveniente de estos métodos es que requieren personal altamente cualificado y tardan hasta un día en ofrecer un resultado analítico. Por lo tanto, no son adecuados para su aplicación en un punto de recepción de un elevador de grano.
La gran cuestión de la precisión
Cuanto más rápido es un método analítico, más a menudo surgen preocupaciones sobre su precisión. Entonces, ¿hasta qué punto son precisas las pruebas LFD? Tanto la tecnología LFD como las pruebas ELISA utilizan el principio de detección por reacción anticuerpo-antígeno, en el que un anticuerpo específico detecta un antígeno único, en este caso una micotoxina, con una sensibilidad determinada. Ambos sistemas de prueba se calibran con materiales de referencia certificados y los resultados se comparan con métodos de referencia acreditados en estudios de validación exhaustivos. No obstante, algunos métodos de prueba pueden no cumplir las expectativas del operador.
¿Qué puede fallar?
Un muestreo correcto (véase el cuadro de texto) es la clave para obtener resultados de análisis precisos. Los grandes lotes de grano (por ejemplo, camiones o barcazas llenos) deben analizarse en busca de micotoxinas antes de ser aceptados en una instalación. Es crucial que se tomen muestras representativas para el análisis. Uno de los factores más significativos que pueden influir en un resultado analítico es la matriz de la mercancía. Idealmente, los métodos de prueba se desarrollan para analizar cualquier tipo de muestra de alimentos o piensos en busca de contaminación por micotoxinas. Sin embargo, un factor limitante es que las diferentes muestras de alimentos o piensos pueden tener distintos componentes que pueden interferir en el resultado analítico, en función de su estructura química y sus propiedades. Las pruebas rápidas basadas en anticuerpos suelen verse influidas por ciertos componentes de la matriz que pueden tener importantes repercusiones en la reacción de unión anticuerpo-analito, lo que puede dar lugar a resultados cuestionables. Los fabricantes de kits de pruebas se enfrentan al reto de reducir o eliminar estas interferencias mediante, por ejemplo, desarrollos específicos de anticuerpos y validaciones de matrices. Otras fuentes de error pueden ser factores ambientales como la temperatura ambiente durante las pruebas. La reacción de unión anticuerpo-antígeno -el principio de detección de todas las pruebas inmunoquímicas- depende de la temperatura. Para obtener resultados precisos, los fabricantes han desarrollado incubadoras de pruebas que mantienen la temperatura constante, eliminando así las interferencias causadas por las fluctuaciones de temperatura. Los operadores de las pruebas analíticas deben estar debidamente formados para administrar las pruebas con precisión. Los distintos métodos de prueba requieren conocimientos diferentes por parte de los operarios.Las pruebas LFD son las pruebas de micotoxinas más fáciles de realizar. Una formación básica es suficiente para mantener al mínimo los errores de los operarios en estos métodos.
Error de muestreo
El error total del resultado analítico de un texto sobre micotoxinas es la suma de los errores de muestreo, de preparación de la muestra y analíticos. El error de muestreo aporta la mayor parte del error en el resultado final. Esto se debe al hecho de que las micotoxinas se distribuyen de forma desigual en las muestras de grano a granel, por lo que es esencial tomar una muestra representativa antes de continuar con la preparación de la muestra y la medición propiamente dicha. Para obtener una muestra representativa de un lote de muestras a granel, es necesario tomar varias muestras elementales de varios lugares. A continuación, estas muestras elementales se combinan para formar una muestra global y, tras su homogeneización y posterior división mediante un divisor mecánico, se toma una muestra analítica para su posterior preparación. Estos procedimientos se describen en los planes de muestreo oficiales de las autoridades, como la Comisión Europea (CE 401/2006 y CE 519/2014). La gran influencia en el resultado analítico final hace que sea esencial que el error de muestreo se reduzca al mínimo. La forma más sencilla de conseguirlo es aumentando el número de lugares de muestreo, así como el tamaño de las muestras incrementales dentro de un plan de muestreo.
¿Cuál es la responsabilidad del fabricante del kit de pruebas?
¿Qué puede hacer un fabricante de kits de pruebas para garantizar que los resultados producidos con sus kits de pruebas sean precisos y fiables? En primer lugar, un fabricante de kits de pruebas necesita educar a los usuarios sobre la importancia de un muestreo correcto, ya que esto es crucial para la exactitud de los resultados. A continuación, necesita demostrar la precisión de su kit de pruebas realizando un estudio de validación que siga las directrices de la USDA GIPSA o la AOAC. El kit de pruebas puede presentarse a estos organismos oficiales para que una tercera parte externa realice una evaluación que confirme el rendimiento declarado del método analítico. Para estas validaciones de terceros, el fabricante de un kit de pruebas debe incluir los datos de validación de las matrices de muestras reclamadas para garantizar que el kit de pruebas funciona con precisión en estas matrices de muestras diferentes. En los estudios de validación, se suelen utilizar múltiples fuentes de muestras, por ejemplo, muestras de maíz de diferentes continentes, para demostrar la fiabilidad del método analítico. Para mejorar aún más la solidez de un sistema de ensayo, también deben eliminarse o tenerse en cuenta los factores ambientales, como la temperatura. Esto puede hacerse utilizando una incubadora para que el desarrollo de la LFD se produzca siempre a una temperatura constante y controlada.
¿Es la precisión el precio que pagan los elevadores de grano por unos resultados rápidos?
Tras observar las operaciones en los puntos de recepción de grano, está claro que las pruebas rápidas de una sola muestra son los métodos de elección. Los dispositivos de flujo lateral cumplen claramente todos los criterios y, además, reducen muchas fuentes de errores de manipulación gracias a su sencillez. Siguiendo unas reglas claras y básicas, la rapidez no tiene por qué ir en detrimento de la precisión. Se pueden obtener resultados fiables y precisos en poco menos de diez minutos y ésa es la clave para analizar y evaluar eficazmente el grano de camión a camión en un punto de recepción.